原位雜交第三天

1） 用1ml含10％熱滅清的MABT溶液置換溶液，放置搖床上25分鐘，然后用1mlMABT置換，25分鐘，再用1mlMABT溶液置換，一小時以上，后用1mlMABT溶液置換，25分鐘。

2） 用1ml 1mM左旋米睉的Staining buffer洗三次，每次放置五分鐘。

3）將胚胎轉(zhuǎn)入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul BM Purple AP Substrate(底物，用之前加5mM左旋米唑)，十六孔板外面包上錫箔紙以避光，避免搖動，室溫下顯色。

4）每隔一小時觀察胚胎是否開始顯色

5）將顯色完全的胚胎中的底物吸出，用PBST洗兩三次后加上4％多聚甲醛固定，拍照。

6）4C冰箱保存。

原位雜交技術(shù)的實驗結(jié)果

原位雜交技術(shù)的實驗結(jié)果包括陽性信號和陰性信號的判斷標準。陽性信號是指探針與目標核酸序列特異性結(jié)合形成的雙鏈復(fù)合物，在顯色反應(yīng)、熒光染色或性同位素標記下呈現(xiàn)出明顯的信號。陰性信號是指探針未與目標核酸序列結(jié)合，不呈現(xiàn)任何信號。實驗結(jié)果的分析需要結(jié)合探針的特異性和敏感性、組織或細胞的原始結(jié)構(gòu)以及實驗條件等因素綜合進行。

原位雜交技術(shù)還在以下生物領(lǐng)域有應(yīng)用：

生態(tài)學和環(huán)境科學：在生態(tài)學和環(huán)境科學領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)可以用于研究生物與環(huán)境之間的相互作用。例如，通過標記特定基因的探針，可以檢測環(huán)境中微生物種群的分布和變化，進而研究其對環(huán)境的影響和作用。

進化生物學：在進化生物學領(lǐng)域，原位雜交技術(shù)可以用于研究物種之間的遺傳差異和進化關(guān)系。例如，通過比較不同物種之間基因序列的差異，可以揭示物種之間的親緣關(guān)系和進化歷程。

生物領(lǐng)域應(yīng)用原位雜交技術(shù)的例子：

基因表達和調(diào)控研究：原位雜交技術(shù)可以用于研究基因表達的調(diào)控機制。例如，可以標記特定基因的探針，檢測該基因在不同環(huán)境、不同生長條件下的表達情況，進而研究其表達調(diào)控機制。

細胞分化與發(fā)育研究：在細胞分化與發(fā)育研究中，原位雜交技術(shù)常被用于檢測和定位特定基因的表達情況，進而了解細胞分化的過程和機制。例如，可以標記與細胞分化相關(guān)的基因探針，檢測該基因在不同組織、不同發(fā)育階段的表達情況。