yao物對細胞的IC50檢測

IC50 (half maximal inhibitory concentration)是指被測量的拮抗劑的半抑制濃度。它能指示某一yao物或者物質(yi制劑)在抑制某些生物程序(或者是包含在此程序中的某些物質，比如酶，細胞受體或是微生物)的半量。自噬形成時，GFP-LC3融合蛋白轉位至自噬體膜，在熒光顯微鏡下形成多個明亮的綠色熒光斑點，一個斑點相當于一個自噬體，可以通過計數來評價自噬活性的高低。在凋亡方面，可以理解為一定濃度的某種藥wu誘導腫liu細胞凋亡50%，該濃度稱為50%抑制濃度，即凋亡細胞與全部細胞數之比等于50%時所對應的濃度，IC50值可以用來衡量yao物誘導凋亡的能力，即誘導能力越強，該數值越低，當然也可以反向說明某種細胞對yao物的耐受程度。

Q:中可能出現的沉淀物是什么？

A:基于多年的實驗研究，用于細胞培養的胎牛以及其它中可能會存在以下種類的沉淀物：

（1）纖維蛋白，它是經常出現的較大的沉淀物，可以達到 1-2mm，可以用肉眼觀察到。電鏡形態學觀察法是一種比較經典、可靠的方法，被認為是確定細胞凋亡的金標準。因為都是在低溫下進行收集和快速處理的，一些纖維蛋白原（可溶性的形成絮狀纖維蛋白的前體）在處理過程中仍然處于溶解狀態，當經過的過濾分裝后，就會在瓶中凝結出現纖維蛋白沉淀。

（2）磷酸鈣，它也是常見的一種沉淀物，通常會使出現渾濁，并且在 37℃ 培養的時候會增加。這種沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像小黑點， 這些小黑點由于布朗運動看上去可以活動，因此經常被誤認為是微生物污染。

（3）膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質。他們也是中出現沉淀物的常見原因。

Q:如何避免中沉淀物的出現？

A:首先要注意正確的解凍步驟，而且溶解過程中一定要每隔一段時間均勻而緩慢的搖動。我們已經發現在下列情況下沉淀物可能增加，使用中應該盡量避免：

（1）熱滅活；

（2）在 37℃ 下培養；

（3）反復凍融；

（4）γ 射線照射；

（5）長期儲存在 2-8℃；

（6）在室溫下放置時間過長

Q:如何去除中的沉淀？

A:如想去除這些絮狀沉淀物，可以將分裝到無菌離心管中，以 400g 離心，上清液即可直接加入到培養基 內一起過濾。

注意：不要以過濾的方式去除這些絮狀沉淀物，因為這可能阻塞濾膜。