MTT檢測(cè)

MTT 是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活xi胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。這是由于zhongt瘤細(xì)胞自身可分泌多種生長(zhǎng)因子，誘導(dǎo)血管生成。二jia基亞砜（DMSO）能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免yi檢測(cè)儀在 570nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其光吸收值，可間接反映活xi胞數(shù)量。

小鼠精原gan細(xì)胞分離富集和培養(yǎng)

成年小鼠gao丸中約有108個(gè)細(xì)胞,其中約有 2×104個(gè)是精原gan細(xì)胞,僅占gao丸生精上皮細(xì)胞總數(shù)的 0.02～0.03%,精原gan細(xì)胞數(shù)量太少不利于體外培養(yǎng).分離和富集精原gan細(xì)胞成為精原gan細(xì)胞體外培養(yǎng)能否成功的前提條件.尋找分離和富集小鼠精原gan細(xì)胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min,用胎牛xue清終止消化,用一次40-um孔徑的濾器過慮制成單 細(xì)胞懸液,30%percoll不連續(xù)密度梯度法離心富集精原gan細(xì)胞,再根椐未分化精原gan細(xì)胞表面thy1.2(CD90.2)陽性CD117(c- kit)陰性特點(diǎn)用流式細(xì)胞儀將精原gan細(xì)胞分選出來,并在體外進(jìn)行培養(yǎng)嘗試. 結(jié)果:30%percoll密度梯度離心前CD117(c-kit)陽性細(xì)胞占13.80±3.34%,CD90.2陽性細(xì)胞占28.98±4.51%, 二者都陽性細(xì)胞占8.98±2.98%,CD117陰性CD90.2陽性細(xì)胞占18.36±2.67%;離心后 CD117(c-kit)陽性細(xì)胞占12.37±3.34%,CD90.2陽性細(xì)胞占56.98±4.51%,二者都陽性細(xì)胞占 8.20±3.98%,CD117陰性CD90.2陽性細(xì)胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)陽性細(xì)胞和二者都陽性細(xì)胞所占百分比前后 比較差異無顯著性(P>0.1),CD90.2陽性細(xì)胞和CD117陰性和CD90.2陽性細(xì)胞所占百分比前后比較差異有顯著性 (P<0.05);采用CD117和CD90.2作為標(biāo)志分子,percoll離心后細(xì)胞懸液經(jīng)FACS分選后獲得細(xì)胞純度

細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染包括細(xì)菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點(diǎn)污染、真菌污染和原生動(dòng)物污染。這些污染在細(xì)胞培養(yǎng)中的特點(diǎn)及相應(yīng)的解決辦法如下：

1.細(xì)菌污染

細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細(xì)砂狀。根據(jù)gan染菌的種類不同，可能會(huì)呈現(xiàn)不同的形狀，培養(yǎng)液一般會(huì)變得渾濁、黃色，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有明顯影響。

解決方法：仔細(xì)檢查器具的滅菌情況，確保通風(fēng)時(shí)間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養(yǎng)基接觸的移液管等物品如果被污染兩次，則可能會(huì)導(dǎo)致儲(chǔ)存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要檢查培養(yǎng)基的渾濁度。此外，建議在培養(yǎng)基中添加抗生su。通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PI)來區(qū)分凋亡和壞死細(xì)胞。