MTT檢測

MTT 是一種檢測細胞存活和生長的方法。其檢測原理為活xi胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性 MTT 還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。這是由于zhongt瘤細胞自身可分泌多種生長因子，誘導血管生成。二jia基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯免yi檢測儀在 570nm 波長處測定其光吸收值，可間接反映活xi胞數量。

小鼠精原gan細胞分離富集和培養

成年小鼠gao丸中約有108個細胞,其中約有 2×104個是精原gan細胞,僅占gao丸生精上皮細胞總數的 0.02～0.03%,精原gan細胞數量太少不利于體外培養.分離和富集精原gan細胞成為精原gan細胞體外培養能否成功的前提條件.尋找分離和富集小鼠精原gan細胞有效方法. 方法:出生6-8天小鼠為實驗對象,先用0.25%胰酶1mM EDTA消化gao丸10min,用胎牛xue清終止消化,用一次40-um孔徑的濾器過慮制成單 細胞懸液,30%percoll不連續密度梯度法離心富集精原gan細胞,再根椐未分化精原gan細胞表面thy1.2(CD90.2)陽性CD117(c- kit)陰性特點用流式細胞儀將精原gan細胞分選出來,并在體外進行培養嘗試. 結果:30%percoll密度梯度離心前CD117(c-kit)陽性細胞占13.80±3.34%,CD90.2陽性細胞占28.98±4.51%, 二者都陽性細胞占8.98±2.98%,CD117陰性CD90.2陽性細胞占18.36±2.67%;離心后 CD117(c-kit)陽性細胞占12.37±3.34%,CD90.2陽性細胞占56.98±4.51%,二者都陽性細胞占 8.20±3.98%,CD117陰性CD90.2陽性細胞占32.36±3.67%;CD117(c-kit)陽性細胞和二者都陽性細胞所占百分比前后 比較差異無顯著性(P>0.1),CD90.2陽性細胞和CD117陰性和CD90.2陽性細胞所占百分比前后比較差異有顯著性 (P<0.05);采用CD117和CD90.2作為標志分子,percoll離心后細胞懸液經FACS分選后獲得細胞純度

細胞培養中常見的生物污染包括細菌污染、霉菌污染、支原體污染、黑點污染、真菌污染和原生動物污染。這些污染在細胞培養中的特點及相應的解決辦法如下：

1.細菌污染

細菌在普通倒置顯微鏡下呈黑色和細砂狀。根據gan染菌的種類不同，可能會呈現不同的形狀，培養液一般會變得渾濁、黃色，對細胞生長有明顯影響。

解決方法：仔細檢查器具的滅菌情況，確保通風時間和高壓滅菌器的壓力是否足夠。重要的是，與培養基接觸的移液管等物品如果被污染兩次，則可能會導致儲存溶液也受到污染。所以一定要注意！下次使用前要檢查培養基的渾濁度。此外，建議在培養基中添加抗生su。通常利用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PI)來區分凋亡和壞死細胞。