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考馬斯亮藍g-250染色法測定蛋白質含量與其他方法相比有什么優缺點

蛋白質的存在影響酸堿滴定中所用某些指示劑的顏色變化，從而改變這些染料的光吸收。在些基礎上發展了蛋白質染色測定方法。涉及的指示劑有甲ji橙、考馬斯亮藍、xiu甲fen綠和xiu jia酚紫。目前廣泛使用的染料是考馬斯亮藍。

考馬斯亮藍G-250在酸性溶液中為棕紅色，當它與蛋白質通過范德華鍵結合后，變為藍色，且在蛋白質一定濃度范圍內符合比爾定律，可在595nm處比色測定。2—5分鐘即呈da光吸收，至少穩定1小時。在0.01—1.0 mg蛋白質/ml范圍內均可。該法操作簡便迅速，消耗樣品量少，但不同蛋白質之間差異大，且標準曲線線性差。高濃度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、bing酮、硫酸銨和去污劑時測定有干擾。緩沖液濃度過高時，改變測定液pH值會影響顯色。考馬斯亮藍染色能力強，比色杯不洗干凈會影響光吸收值，不可用石英懷測定

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考馬斯亮藍染色方法

馬斯亮藍染色是用考馬斯亮藍進行蛋白質染色的方法。考馬斯亮藍是一種陰離子染料， 常用考馬斯亮藍G250和R250。考馬斯亮藍 G250在游離狀態下呈紅色，當它與蛋白質 通過疏水結合后變為藍色，蛋白質-色素結 合物在595nm波長下有da光吸收。其光 吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。 考馬斯亮藍G250染色可以同時固定和染色，因此能立即觀察顯色結果，可用來確定電泳時間，觀察初步結果。考馬斯亮藍R250染色靈敏度比G250髙得多，但對酸溶蛋白、醇溶蛋白不合適，因為在染色過程中，蛋白質會溶解在染色液或脫色液中。可用于SDS-PAGE 或非變性PAGE蛋白電泳的快速染色，或Western轉膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測。

性狀亮藍為有金屬光澤的深紫色至青銅色顆粒或粉末，無臭。易溶于水，水溶液呈亮藍色；可溶于乙醇、丙二醇和甘油。耐光性、耐熱性、耐酸性、耐鹽性和耐微生物性很好，耐堿性和耐氧化還原特性較佳。弱酸時呈青色，強酸時呈黃色，在沸騰堿液中呈紫色 [1] 。性能亮藍的色度極強，通常都是與其他食用著色劑配合使用，使用量小，在0.0005%~0.01%之間 [1] 。應用根據我國《食品添加劑使用衛生標準》（GB2760-1996）中規定：亮藍可用于果味型飲料（液、固體）、果汁型飲料、汽水、配制酒、糖果、糕點上彩裝、紅綠絲、罐頭、濃縮果汁、青梅、對蝦片，使用量為0.025g/kg；冰淇淋，使用量為0.021999g/kg。紅綠絲的使用量可加倍；果味粉著色劑加入量按稀釋倍數的50%加入 [1] 。

亮藍（BrilliantBlueFCF）別稱為食用青色1號（日），是由鄰磺酸與N-，N-（3-磺基芐基）-縮合反應后空氣氧化，利用當代的生物科技做成的食用合出黑色素。亮藍是一種人造食用染劑，外型為紅藍紫色勻稱粉末狀或顆粒物，有金屬質感，無臭，亮藍具備酸性染料的特點，能使動物纖維著色。溶于于水（18.7g/100mL，21℃），呈綠色光深藍色水溶液，溶精（1.5g/100mL，95%酒精，21℃）、凡士林、丙二醇。耐光性、耐溫性強。對檸檬酸鈉、酒石酸、堿均平穩、顏色艷麗、調色當然、著色力好、色彩不容易受pH危害。