RNA提取

1.棄去培養液，用PBS清洗兩次1-2。

2.棄去PBS，用1000u1吸干凈殘余PBS。

3.加1ml TRIZOL研磨B 41。

4. 1.5mIEP管標號與每孔相對應備用。

5.研磨好的溶液轉移至對應的 EP管中國。

6.往每個EP管中加入250ul，劇烈震蕩30s， 冰上靜置12min[問l。

7. 所有樣品4C離心，轉速: 13500轉1分鐘，時間: 15min.

8. 再次標記一批同樣編號EP管。

9.離心后吸上清液400u1移入相應編號的EP管中，再加入400ul異充

分混勻。4C冰箱35min。

10. 4C離心，轉速: 13500轉1分鐘，時間: 10min.

11.棄去.上清液，加1m175%乙醇，輕搖7]。

12. 4C離心，10600轉/分鐘，時間: 5min.

13. 棄上清液濾紙吸干。

14. 加DEPC水10ul溶解，-80C保存。進行逆轉錄前測濃度。

組織RNA提取

1、剪米粒大小組織塊放入EP管中標號。

2、EP管中加300ul trizol浸泡30分鐘或更久。

3、用研磨棒研磨，以肉眼很難看到組織為宜。

4、加700u1 trizol靜 置5分鐘。

Southern雜交

實驗原理

Southern印跡雜交（Southern blot）是1975年由英國人southern創建，是研究DNA圖譜的基本技術。Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNAl片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNAl片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結構的標記探針進行雜交，用放l射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定DNA分子的含量。這些方法究竟孰優孰劣，斯坦福大學醫學院遺傳學系的研究人員對市場上三個主流的外顯子組測序平臺進行了比較。

蛋白質定量組學服務

細胞內蛋白質組豐度的動態變化對不同生命過程有重要影響。例如在許多疾病的發生和發展進程中，常常伴隨著某些蛋白質的表達異常。目前定量蛋白質組學技術主要分為標記(label)策略和非標記的(label free)定量策略，其中標記策略又分為體內標記(如 SILAC、15N 標記)，以及體外標記(如 iTRAQ、TMT 標記) 。在測定時，受檢標本(測定其中的抗ti或抗原)與固相載體表面的抗原或抗ti起反應，洗滌使固相載體上形成的抗原抗ti復合物與液體中的其他物質分開，再加入酶標記的抗原或抗ti，通過反應使其結合在固相載體上。

傳統的基于2D雙向凝膠電泳分離的蛋白質組通?？梢澡b定出約1000種蛋白，對全蛋白質組的覆蓋僅在5~10%左右，不能滿足高通量定量蛋白質表達譜分析的要求。我們結合樣品制備與高分辨率、高靈敏度的液相色譜-質譜聯用技術，可在細胞與組織類樣品中鑒定直至多于10000個蛋白，對全蛋白質組的覆蓋>60%。結合生物信息學分析，為您構建高通量蛋白質定量表達譜。宿主細胞不能像包裝細胞那樣為缺失結構基因的逆轉錄病毒提供結構蛋白，因而在宿主細胞內不會產生新的毒顆粒，保證了該載體在生物制品領域的生物安全性問題。

通常活性氧陽性對照在刺激細胞20-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。

收集細胞后裝載探針：按照1：1000用無培養液稀釋DCFH-DA，使終濃度為10微摩爾/升。細胞收集后懸浮于稀釋好的DCFH-DA中，細胞濃度為一百萬至二千萬/毫升，37℃細胞培養箱內孵育20分鐘。每隔3-5分鐘顛倒混勻一下，使探針和細胞充分接觸。用無細胞培養液洗滌細胞三次，以充分去除未進入細胞內的DCFH-DA。直接用活性氧陽性對照及自己感興趣的刺激細胞，或把細胞等分成若干份后刺激細胞。通?；钚匝蹶栃詫φ赵诖碳ぜ毎?0-30分鐘后可以顯著提高活性氧水平。一方面，多數蛋白質的溶解度隨著溫度的升高而增大，因此，溫度高利于溶解，縮短提取時間。

2.、檢測

對于原位裝載探針的樣品可以用激光共聚焦顯微鏡直接觀察，或收集細胞后用熒光分光光度計、熒光或流式細胞儀檢測。

對于收集細胞后裝載探針的樣品可以用熒光分光光度計、熒光或流式細胞儀檢測，用激光共聚焦顯微鏡直接觀察也可以。