分光光度計的工作原理

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分光光度計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長的光源，光線透過測試的樣品后，部分光線被吸收，計算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長度）成正比，其關(guān)系如下式：

A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc

式中 :A 為吸光度；

I0為入射的單色光強度；

I 為透射的單色光強度；

T 為物質(zhì)的透射率；

k 為摩爾吸收系數(shù)；

L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長；

c 為物質(zhì)的濃度；

分光光度計的操作方法

1.接通電源，打開儀器開關(guān)，掀開樣品室暗箱蓋，預熱10分鐘。

2.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時，需選用較高的檔。）

3.根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。

4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準光路。

5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處。

6.蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。

7.比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。

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使用分光光度計的注意事項

1．該儀器應放在干燥的房間內(nèi)，使用時放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，室內(nèi)照明不宜太強。熱天時不能用電扇直接向儀器吹風，防止燈泡燈絲發(fā)亮不穩(wěn)定。

2．使用本儀器前，使用者應該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理，以及各個操縱旋鈕之功能。在未按通電源之前，應該對儀器的安全性能進行檢查，電源接線應牢固，通電也要良好，各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應該正確，然后再按通電源開關(guān)。

3．在儀器尚未接通電源時，電表指針必須于“0”刻線上，若不是這種情況，則可以用電表上的校正螺絲進行調(diào)節(jié)。

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分光光度計的關(guān)鍵參數(shù)有哪些

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選擇可見和紫外可見的分光光度計所關(guān)注的*關(guān)鍵的指標有三點：一是波長范圍，二是波長準確度，三是雜散光參數(shù)。波長范圍的選擇是由用戶實驗需要所定，波長范圍越寬的價格越貴;波長準確度及雜散光參數(shù)的數(shù)值越低，表示性能越好。

影響顯色反應的主要因素

(1)顯色劑用量：通過實驗來確定*適用量；

(2)反應液的酸堿度(pH)溶液酸堿度直接影響金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物組成的穩(wěn)定性；

(3)反應溫度：不同的顯色反應需要不同的反應溫度，一般顯色反應可在室溫下完成；

(4)顯色反應時間：顯色反應的速度有快有慢；

(5)干擾離子的影響：應采用適當方法消除其影響；