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低溫為什么可以進(jìn)行生物樣品的保存？主要是因為：水份是生物樣品里的主要成份，而在深低溫，即溫度低于-８0℃，水存在晶體狀態(tài)和玻璃態(tài)２種物理方式。而從熱力學(xué)角度分析，水的這２種狀態(tài)的水分子都具有很高的粘度，并且?guī)缀醪粫U(kuò)展。水的這個在深低溫下幾乎不會擴(kuò)散的特性為生物樣品的低溫保存提供了可能。深低溫狀態(tài)下水存在的晶體狀態(tài)和玻璃態(tài)２種狀態(tài)，低溫保存也同樣分為慢速降溫和快速降溫（玻璃化）２種方式。

快速降溫保存，即玻璃化方法就是用高濃度的冷凍稀釋液,以極快的速率降溫,使溶液內(nèi)沒有足夠的時間形成冰晶核就直接轉(zhuǎn)變成無形態(tài)的玻璃樣固體的過程。此方法的優(yōu)點是不用的程序控制降溫儀,操作簡便、快速,減輕損傷,但是由于在降溫過程中需要加入大量的冷凍保護(hù)劑，高達(dá)40-60%v/v,這些冷凍保護(hù)劑往往存在一定毒性會內(nèi)部細(xì)胞，同時由于玻璃化過程中為了確保整個生物樣品的內(nèi)部和外部均能實現(xiàn)快速降溫，需要減少樣品的尺寸、以及增加和外界超低溫環(huán)境（比如液氮）的接觸面積。因此這種暫時只適用于小尺寸、小計量生物樣品的保存，僅有ul單位。所以，目前大家還是通常采取慢速降溫進(jìn)行低溫保存。

細(xì)胞冷凍保存,1. 材料：生長良好之培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO (Sigma D-2650)、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene　5000-0020)、0. 4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球計數(shù)盤與蓋玻片、細(xì)胞凍存程序儀(也稱為程序降溫儀。冷凍保存方法：(1)傳統(tǒng)方法: 冷存管置于4 ℃10分鐘--->-20 ℃30分鐘--->-80 ℃ 16～18小時(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長期儲存。-20 ℃不可超過1小時，以防止胞內(nèi)冰晶過大，造成細(xì)胞大量，亦可跳過此步驟直接放入-80 ℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。(2)程序降溫：利用已設(shè)定程序的等速細(xì)胞凍存程序儀以-1～-3 ℃/分鐘之速度由室溫降至(-80 ℃以下)-120 ℃，再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。