7分鐘前 西藏動物實驗室來電垂詢「在線咨詢」[英瀚斯2eefa30]內(nèi)容：簡單介紹Agomir高架十字迷宮行為學(xué)檢測：

實驗原理

高架十字迷宮（the elevated plus maze,EPM）是評價嚙齒類動物焦躁反應(yīng)的實驗方法 , 相較傷害性刺激所致小鼠焦躁行為檢測（如電刺激 、 噪聲刺激 、 飲食剝奪和暴露在捕食者氣味等）, 該實驗具有操作簡單的優(yōu)點 , 能直觀反映小鼠的條件應(yīng)答 。 EPM實驗是在高架Y型迷宮的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的 。 EPM由開臂（open arms和閉臂（closed arms）各兩條組成 , 呈十字形交叉 , 交義部分為中央?yún)^(qū) , 距地面有一定高度 。其原理是由于面對新事物開臂 小鼠會產(chǎn)生好奇心去探究 , 而它們有嗜暗的天性（閉臂）, 兩者之間發(fā)生探究與回避的沖突行為，產(chǎn)生焦躁心理。整個迷宮距離地面的高度相當(dāng)于人類站在懸崖邊，易導(dǎo)致動物產(chǎn)生恐懼不安的心理。可以通過對比小鼠在開臂和閉臂內(nèi)的滯留時間和路程來評價小鼠的焦躁行為。

EPM實驗在藥品開發(fā)和研究中得到廣泛的應(yīng)用：主要用于苯二氮卓類藥品的抗焦躁作用研究 及篩選具有抗焦l慮作用的新藥,也被用于研究精神性藥品濫用的影響及激s素的功能,應(yīng)激對生殖、衰老、妊s娠的影響等。抗焦l慮藥主要選擇性地抑制邊緣系統(tǒng) 的海馬、杏仁核 ,產(chǎn)生抗焦躁作用。

因 SP 是單只大鼠進(jìn)行實驗且在實驗中大鼠的活動空間受限，故有學(xué)者認(rèn)為以上的臨床與實驗室表現(xiàn)可能與大鼠的群體隔離或活動空間受限有關(guān)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在實驗前群體飼養(yǎng)的動物當(dāng)與群體隔離后也會出現(xiàn)攻擊行為增加，血漿中 CORT 增加，功能抑制等表現(xiàn)。大鼠活動空間受限也可引起血漿中 CORT 的水平的增加，這些結(jié)果與單平臺睡眠剝奪實驗中見到的類似，為克服SP 中大鼠與群體分離及活動空間受限的缺點，在 SP 基礎(chǔ)上進(jìn)一步發(fā)展為多平臺睡眠剝奪法。

1.2多平臺睡眠剝奪法

M P法于1981年先應(yīng)用在大鼠睡眠剝奪實驗中，在 M P中為擴展大鼠的活動空間將臺由 SP 中的 1 個增加至 7 個，仍將1只大鼠放在臺間進(jìn)行睡眠剝奪試驗，因大鼠可以在 7個臺間自由活動，故活動范圍較 SP 中有明顯增大。經(jīng)實驗比較，在M P中反映應(yīng)激增強的一些指標(biāo)，如上腺重量增加和胸腺重量減少仍然存在，甚至在大鼠血液中 ACTH %CORT 的增加及上腺重量的增加較SP的更高，提示 M P較SP有更強的應(yīng)激性!考慮到大鼠為群居動物，單只大鼠實驗易導(dǎo)致與所在群體的隔離。為克服群體隔離所帶來的應(yīng)激反應(yīng)，有學(xué)者將 M P 法進(jìn)一步改良發(fā)展為改良多平臺睡眠剝奪法!

簡單介紹Agomiragomir的使用需要注意以下幾點：?agomir的設(shè)計需要參考miRbase數(shù)據(jù)庫中的微RNA序列，選擇合適的靶基因和靶組織。?agomir的劑量和給yao方式需要根據(jù)實驗?zāi)康暮蛣游锬Ｐ瓦M(jìn)行優(yōu)化，一般建議從低劑量開始逐步增加，觀察效果和副作用。?agomir的效果持續(xù)時間一般為1周以上，甚至可達(dá)5-6周，因此需要合理安排實驗時間點和取樣方式。?agomir的使用需要配合相應(yīng)的負(fù)對照（negative control），即沒有靶基因結(jié)合位點的隨機序列修飾物，以排除非特異性效應(yīng)。?agomir的使用需要結(jié)合其他方法進(jìn)行驗證，如RT-qPCR、Western blot、免mian疫組化等，以評估微RNA和靶基因表達(dá)水平的變化。