動物組織細胞基因組DNA提取

操作步驟

1. 取新鮮或冰凍動物組織塊0.1g（0.5cm3），盡量剪碎。置于玻璃勻漿器中，加入1ml的細胞裂解緩沖液勻漿至不見組織塊，轉入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K

（500ug/ml）20μl，混勻。在65℃恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉入37℃水浴12～24h，間歇振蕩離心管數次。于臺式離心機以12000 rpm離心5min，取上清液入另

一離心管中。

2.加2倍體積異，倒轉混勻后，可以看見絲狀物，用100ul 吸頭挑出，涼干，用200ul TE 重新溶解。（可進行PCR反應等，需要進一步純化的按下列步驟進行）

3.加等量的酚??振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

4.取上層溶液至另一管，加入等體積的?，振蕩混勻，離心12000 rpm，5min。

5. 取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L氨加入2倍體積的無水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ，離心12000 rpm ,10min。

6.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。

7.用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次，離心12000 rpm ， 5min。

8.小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。

9.加200ul TE重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?C20℃保存備用。

10.吸取適量樣品于GeneQuant上檢測濃度和純度。

EMSA實驗

EMSA:凝膠遷移或電泳遷移率檢測是一種檢測蛋白質和DNA序列相結合的技術，初用于研究DNA結合蛋白和其相關的DNA結合序列相互作用，可用于定性和定量分析。分為2種類型：同位素標記探針，非同位素標記探針。

通常將純化的蛋白和細胞粗提液和32P同位素標記的DNA或RNA探針一同保溫，在非變性的聚bing烯凝膠電泳上，分離復合物和非結合的探針。DNA-復合物或RNA-復合物比非結合的探針移動得慢。同位素標記的探針依研究的結合蛋白的不同，可是雙鏈或者是單鏈。當檢測如轉錄調控因子一類的DNA結合蛋白，可用純化蛋白，部分純化蛋白，或核細胞抽提液。在檢測RNA結合蛋白時，依據目的RNA結合蛋白的位置，可用純化或部分純化的蛋白，也可用核或胞質細胞抽提液。競爭實驗中采用含蛋白結合序列的DNA或RN片duan和gua核苷酸片段（特異），和其它非相關的片段（非特異），來確定DNA或RNA結合蛋白的特異性。在競爭的特異和非特異片段的存在下，依據復合物的特點和強度來確定特異結合。具體操作參見SN0169-92《中華人民共和國進出口商品檢驗行業標準出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸檢驗方法》。

單細胞測序（英語：Single cell sequencing）采取優化的下一代DNA測序技術（NGS）檢測單細胞的序列，可以獲得特定微環境下的細胞序列差異以方便研究其功能差異等。對個體細胞的DNA測序可以幫助我們了解例如在中的小范圍細胞的變異；掃描后的圖像用ImageMaster2DPlatinumsoftware軟件進行分析。對其進行RNA測序可以幫助我們了解和鑒別不同的細胞類型與其表現的基因，對研究發育生物學等有較大裨益。

分離單細胞

在全基因組擴增和測序前，有很多方法可以分離細胞個體，其中流式細胞術（FACS）較為常用。個體細胞可以用顯微操作來收集，這樣較為快捷而且成本較低，但是比較有技術難度，而且顯微鏡下對細胞的錯誤分類容易影響實驗結果。激光捕獲顯微切割技術（LCM）亦可以用來收集單細胞。但是盡管激光捕獲顯微切割可以保留樣本細胞在組織中的空間位置，但是捕獲單細胞的時候容易連帶周圍細胞的物質。高通量的細胞個體分離還可以使用微流控技術。微流控技術和流式細胞技術都能準確而自動地分離無偏樣本。但是，兩種方法都要求首先將細胞從其為環境中脫離，因此可能在RNA表達分析中造成對轉錄數據的干擾。當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質與蛋白質間的相互作用也被保留下來。

11.如何溶解引物？

答：干燥后的引物質地非常疏松，開蓋前好離心一下，或管垂直向上在桌面上敲敲，將引物粉末收集到管底。根據計算出的體積加入去離子無菌水或10mM Tris pH7.5緩沖液，室溫放置幾分鐘，振蕩助溶，離心將溶液收集到管底。溶解引物用的水一般不要用蒸餾水，因為有些蒸餾水的pH值比較低（pH4-5）,引物在這種條件下不穩定。報告:根據證實為大腸陽性的管數，查MPN表，報告每100ml(g)大腸菌群的MPN值。

12.如何保存引物？

答：引物合成后，經過一系列處理和純化步驟，旋轉干燥而成片狀物質。引物在溶解前，室溫狀態下可以長期保存。溶解后的引物-20度可以長期保存。如果對實驗的重復性要求較高，合成的OD數較大，建議分裝，避免反復凍融。修飾熒光引物需要避光保存。