酶底物法封口機檢測優(yōu)勢

1.無需在無菌室內(nèi)操作。

2.手工操作時間小于1分鐘。

3.無需培養(yǎng)基制備和大量玻璃器皿滅菌。

4.24小時即可完成定性定量分析，無需驗證試驗。

操作方法

一：將水樣加入100ml取樣瓶中，加入酶底物法檢測試劑，擰緊蓋子搖勻至完全溶解。

二：將樣品加到定量檢測盤中。

三：使用程控定量封口機對定量檢測盤進行樣品分配及封口。

四：將封口好的定量檢測盤放在36±1℃，如需測定糞大腸菌群（耐熱大腸菌群）則將培養(yǎng)箱設(shè)定為44.5℃，培養(yǎng)24h。

五：對照比色盤數(shù)陽性（顯黃色，或熒光）格子數(shù)，按照使用的檢測盤類型，分別查51孔或者97孔MPN表得出100毫升中大腸菌群的菌群數(shù)，對照MPN表出數(shù)據(jù)。

六：根據(jù)稀釋倍數(shù)結(jié)果按公式計算結(jié)果大腸菌群(個/L)=MPN值×稀釋倍數(shù)×1000mL/100mL。

水質(zhì)大腸菌群酶底物法檢測系統(tǒng)：由LK-2010國產(chǎn)程控定量封口機、51或97孔定量檢測盤、100mL定量瓶、酶底物檢測試劑四部分組成。檢測水樣范圍:飲用水、源水、瓶裝水、中水、二次供水、管網(wǎng)水、廢水、食品水、畜牧用水、用水等。初發(fā)酵試驗1、水樣稀釋：制備水樣10-1、10-2的稀釋液，方法為用無菌移液管吸取水樣10mL放于盛有90mL無菌水和若干玻璃珠的錐形瓶中，充分振蕩使混合均勻，并使其中的細菌盡量呈單個存在，即為10-1稀釋液；再從10-1制備10-2稀釋液。以此類推，稀釋到所需倍數(shù)。2、接種和培養(yǎng)：以無菌操作于5支三倍濃縮培養(yǎng)基（接種前一定應(yīng)先檢查杜漢氏小管內(nèi)有無氣泡）中各加入水樣10mL，5支普通培養(yǎng)基試管中加入水樣1mL，5支普通培養(yǎng)基試管中加入10-1稀釋液1mL， 小心混勻放入37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h 。此即5管法。3、結(jié)果觀察：37℃中培養(yǎng)24h后取出觀察，觀察有無氣體（杜漢氏小管內(nèi)有無氣體）和酸產(chǎn)生（培養(yǎng)基有無變色）。在48h之間，培養(yǎng)管內(nèi)倒置的杜漢氏小管內(nèi)有任何量的氣體積累，或培養(yǎng)基顏色從紫色變?yōu)辄S色，便可初步斷定為陽性反應(yīng)。

濾膜法(MF，membranefilter)濾膜法：是目前為流行的檢測水中大腸群的方法。濾膜法的具體步驟是首先將一定量的水體樣本注入0.45μm的濾膜過濾，經(jīng)過抽濾，水中的細菌則被留在濾膜上，將濾膜貼于品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上培養(yǎng)24h，溫度為恒溫37℃，這使得菌群因發(fā)酵乳糖而使得濾膜出現(xiàn)紫紅色，通過計算濾膜上的菌落進而計算出單位樣本中的大腸的數(shù)量。

用ISO9308－1規(guī)定的濾膜法測定水中大腸回收率均值為94.7%，批內(nèi)變異系數(shù)小于10%，檢出限為500mL水樣可檢出1個CFU。該方法費用較低、原理簡單、利于推廣，但檢測時間相對較長、步驟繁瑣、干擾因素多，不適于大量樣品的分析，無法滿足污染物品快速檢測需求。