8分鐘前 植物RNA原位雜交技術(shù)服務(wù)服務(wù)周到「科銳諾」[科銳諾44070b2]內(nèi)容：近年來基因檢測在結(jié)1核病診斷中應(yīng)用越來越廣泛，但主要應(yīng)用于痰液等新鮮標(biāo)本，在石蠟包埋組織標(biāo)本中應(yīng)用非常少。我們建立了利用熒光定量PCR及膜探針雜交法鑒別診斷結(jié)1核病與非結(jié)1核分枝桿1菌病的分子病理檢測方法；建立了利用高分辨溶解曲線法檢測1線抗結(jié)1核核1心藥1物利福平及異煙肼的耐藥情況的分子病理檢測方法。我們在首都臨床醫(yī)學(xué)發(fā)展專項(xiàng)的資助下進(jìn)行大樣本臨床驗(yàn)證。這些方法也將陸續(xù)轉(zhuǎn)化為我院分子病理診斷項(xiàng)目。

原位雜交雜交液注意事項(xiàng)：

（1）雜交液內(nèi)除含一定濃度的標(biāo)記探針外，還含有較高濃度的鹽類、甲酰胺、硫酸葡聚糖、牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等。

（2）雜交液中含有較高濃度的Na+可使雜交率增加，可以減低探針與組織標(biāo)本之間的靜電結(jié)合。甲酰胺可使Tm降低，雜交液中含每1%的甲酰胺可分別使RNA：RNA，RNA：DNA，DNA：DNA的雜交溫度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以雜交液中加入適量的甲酰胺，可避免因雜交溫度過高而引起的組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的破壞以及標(biāo)本的脫落。硫酸葡聚糖能與水結(jié)合，從而減少雜交液的有效容積，提高探針有效濃度，以達(dá)到提高雜交率的目的（尤其對雙鏈核酸探針）。

在雜交液中加入牛血1清白蛋白及載體DNA或RNA等，都是為了阻斷探針與組織結(jié)構(gòu)成分之間的非特異性結(jié)合，以減低背景。

滴加FITC-TSA：滴加FITC-TSA試劑，避光室溫反應(yīng)5min。后TBST洗3次×10min，PBS洗1次×5min。

DAPI復(fù)染核：切片滴加DAPI染液，避光孵育8min，沖洗后滴加抗熒光淬滅封片1劑封片。

鏡檢拍照：切片于尼康正置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm,發(fā)藍(lán)光；FAM(488)綠光激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光；CY3紅光激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光。）