5分鐘前 植物原位雜交檢測服務免費咨詢 科銳諾[科銳諾44070b2]內容：

菌落的裂解及DNA結合于纖維素濾膜

（1） 在一張保鮮膜上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，將濾膜放到小洼上，展平保鮮膜，使濾膜均勻濕潤，讓濾膜留于原處2-3分鐘。

（2） 用干紙巾從濾膜的下方吸干濾膜，用一張新的保鮮膜和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟（1）。

（3） 吸干濾膜，將濾膜轉移到新的帶有1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上。5分鐘后吸干濾膜，再重復一次該步驟。

（4） 吸干濾膜，把它轉移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上5分鐘后吸干濾膜，轉移到一張干的濾紙上，置于室溫20-30分鐘，使濾膜干燥。

（5） 將濾膜夾在兩張干的濾紙之間，在真空烤箱中于80℃干烤2小時，固定DNA。

（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。

分子病理學是一門新興學科，是在基因水平上用分子生物學技術研究疾病發生1發展的一個病理學分支學科。分子病理學進行的檢測通常稱之為基因檢測，即取檢測者的腫1瘤組織、胸水或血液等，經提取和擴增其基因信息后，通過相應的分子生物學技術，對被檢測者細胞中的DNA分子的基因信息進行檢測，分析他的基因狀態，從而對腫1瘤的診斷或治1療提供一定的幫助。

阻斷內源性過氧化物酶：滴加3%1甲1醇-H2O2，室溫避光孵育15min，將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。

預雜交：滴加預雜交液，37°C孵育1h。

雜交：傾去預雜交液，滴加含探針has-circ-ST6GALNAC6 probe 雜交液，濃度6ng/ul，恒溫箱37度雜交過夜。

雜交后洗滌：洗去雜交液，2×SSC，37°C 洗10min，1×SSC，37°C洗2×5min，0.5×SSC室溫洗10min。若非特異雜交體較多，可以增加甲酰胺洗滌。

滴加封閉液：滴加封閉血1清（正常兔血1清），室溫30min。

滴加鼠抗地1高辛標記過氧化物酶（anti-DIG-HRP）：傾去封閉液，滴加anti-DIG-HRP。37°C孵育50min，后PBS洗3次×5min。